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重庆细胞的原代培育一下都是一些简单的介绍

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重庆细胞的原代培育一下都是一些简单的介绍

发布日期:2018-06-05 作者: 点击:

  器件与试剂


  关于样品量较少的安排,选用安排块培育法。


  行将安排剪成小块后接种于培育瓶(皿)。详细操作规程如下:


  将样品切成1mm3左右的小块。在剪切过程中,向样品滴加少数培育液,以坚持样品湿润。


  将剪切好的安排小块,用眼科镊子送入培育瓶(皿)内,用牙科探针或弯头镊子将安排块在瓶壁上均匀摆置,小块距离0.5cm左右。悄悄将培育瓶翻转,让放置样品的瓶壁朝上,向瓶内注入适量培育液,盖好瓶盖,将培育瓶歪斜放置入二氧化碳培育箱中。


  放置3小时后,待安排小块贴附后,将培育瓶渐渐翻转平放,拧松瓶盖,静置培育。原代培育第4地利换液一次。


  2 对很多样品的培育,宜选用安排别离的办法培育。


  2.1安排的别离


  2.1.2 培育资料为血液、羊水、胸水和腹水等细胞悬液时,选用离心法别离。用小型台式离心机1000 rpm(约110-120G的离心力)离心5分钟(以下离心条件同),去除上清液。


  2.1.3 对一些纤维成份很少的安排(如脑安排、部分胚胎安排以及一些肿瘤安排)进行别离处理时,在细胞培育液内用剪刀剪切后用吸管反复吹打涣散细胞;或将样品挤压经过不锈钢网(孔径在80目以上)的办法进行别离。离心过滤液,收集细胞。去除上清液。


  2.1.4 关于不适于上述两种办法别离的样品,选用消化别离办法,行将剪切成较小体积的安排块经过胰蛋白酶或胶原酶消化进行进一步的涣散。对细胞间质较少的软安排,如胚胎、上皮、肝、肾等安排宜运用胰蛋白酶。在进行消化时,用0.25%的胰蛋白酶,pH8的条件下在37℃消化20分钟。对胰蛋白酶耐受性差的样品,消化期间应经过显微镜随时调查消化状况,选用分次消化,及时把已消化别离下来的细胞与安排分隔,放入含有血清的培育液中,替换消化液后再继续消化。关于纤维性安排、上皮及癌安排宜运用胶原酶进行消化别离。消化时选用0.2μg/ml的胶原酶溶液37℃条件下消化4-48小时,可根据细胞涣散的程度而定。在消化别离法中,随时汲取少数消化液在显微镜下调查,如发现安排已涣散成细胞团或单个细胞,则停止消化。经过孔径适当的筛网,滤掉未消化的样品块。已过滤的消化液1000 rpm离心5分钟,去除上清,加含10%血清的培育液,悄悄吹打构成细胞悬浮液,再次离心,去除上清液。


  2.2 参加含20%血清的细胞培育液,悄悄吸打离心后收集到的细胞,使之涣散均匀。进行细胞计数,然后接种到含20%血清的细胞培育液的培育瓶(皿)中,松松盖上瓶盖,放入二氧化碳培育箱内培育。


  2.3原代培育第4地利换液一次。

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